摘 要:目的:观察中药配方“芪香”气雾剂诱生干扰素的作用。方法:将小鼠随机分成对照组和实验组2组。喂药7 d后,采用微量细胞病毒抑制法检测干扰素的变化情况。结果:“芪香”气雾剂对新城鸡瘟病毒(NDV)诱生小鼠干扰素起促进作用,与对照组相比,具有非常显著性差异(P<0.01)。结论:“芪香”气雾剂能诱生一定量的干扰素,表明“芪香”气雾剂的抗病毒作用与其能诱生干扰素有关。
关键词:“芪香”气雾剂;干扰素;微量细胞病变抑制法
干扰素(IFN)有抗病毒、免疫调节、抗肿瘤等多种功能,干扰素系统是生物细胞普遍存在的一个防御系统。目前由病毒引起的感染约占传染病总数的3/4,涉及临床各科,但尚没有理想的治疗方法对其进行有效治疗,所以人们把眼光投向了干扰素。“芪香”气雾剂是经过对中药的筛选,选出黄芪、刺五加、香薷、甘草等按君、臣、佐、使的原则组成的复方,本实验主要研究“芪香”气雾剂对小鼠诱生干扰素的影响。
1 实验材料
1.1 实验动物与分组昆明种小鼠20只,雌雄不拘,由四川省医学科学院实验动物研究所提供(合格证号:川实动管质第15号),随机分为对照组和实验组2组,每组10只。
1.2 实验药物“芪香”气雾剂由黄芪、刺五加、香薷、甘草等组成,每剂制成浓度为100%的药液lOO mL,装入喷雾瓶中,每瓶10 mL,每次喷雾剂量为60 mg。
1.3 检测细胞及病毒小鼠成纤维细胞(L929);新城鸡瘟病毒(NDV),血凝效价为1280 u/mL;滤泡性口腔炎病毒(VSV-Indiana株)TCID50 为l0-6 ,以上均由四川省防疫站病毒所提供,按常规方法传代、增殖。小鼠成纤维细胞标准干扰素购自Sigma公司。
2 实验方法
小鼠血清干扰素测定方法采用微量细胞病变抑制法(CPE)\[1\]。选生长良好的L929细胞,经消化后用1640液调细胞浓度为2×10 个/mL,加入96孔培养板上,每孔0.1mL,置5 %的CO2 孵箱中37℃培养24 h,待细胞长成单层后弃去孔内液体,加入不同稀释倍数的待测样本,每稀释度加3孔,每孔0.1 mL(标准小鼠干扰素倍比稀释后同样各浓度3孔,作校正用),置5 %的CO2 孵箱中37℃培养24 h后弃去孔内液体用1640液洗两遍,用100个TCID50的VSV攻击,待病毒对照孔出现++++时(约16~24 h)记录结果,以能抑制50 %细胞病变的最高稀释度的倒数为U/mL,然后再与标准干扰素校正。实验组以100%”芪香”气雾剂喷雾,每日3次,每次2 mL,连续7 d;对照组以等体积纯净水代药。第8 d每只小鼠腹腔注射1280HAU/mL NDV 0.5 mL,6 h后放血处死,分离血清后用CPE法在VSV-L929细胞系统上检测干扰素效价,并与标准小鼠成纤维细胞干扰素校正。
3 实验结果结果
表明“芪香”气雾剂具有明显的促进小鼠干扰素诱生作用。见表1。
表1 “芪香”气雾剂对NDV诱导小鼠干扰素的促进作用(略)
4 讨论
干扰素是一种广谱的抗病毒物质,几乎对所有病毒都有一定程度的抑制作用。人体细胞本身就能产生一定量的干扰素,具有抗病毒蛋白的基因,只是正常情况下处于静止状态,当干扰素与细胞膜上的干扰素受体结合时,编码抗病毒蛋白的基因活化,继而合成抗病毒蛋白,使细胞处于抗病毒状态。但人工合成的干扰素价格昂贵,数量又少,很难广泛应用,所以调动机体自身细胞产生干扰素,作用于细胞的抗病毒蛋白,使静止的抗病毒蛋白的基因活化,从而达到抗病毒的目的。据现代研究发现,许多中草药具有诱导机体产生干扰素的作用,在对中药有效成份进行有关干扰素促诱生效应的研究\[2\]中,认为中药多糖促诱生干扰素能力最好\[3\]。本方组成药物黄芪、刺五加含有大量的多糖,实验结果也显示了本方有很好的促诱生干扰素效应。为了进一步研究“芪香”气雾剂的抗病毒作用,本课题组将在本文实验的基础上观察“芪香”气雾剂对流感病毒株的影响,并观察“芪香”气雾剂的体内抗病毒作用,以便为其临床用药提供较为充分的实验室依据。
参考文献:
\[1\]黄桢祥.医学病毒学基础及实验技术\[M\].北京:科学出版社,1990:137-141.
\[2\]杨吉成,刘静山,盛伟华.多糖类及刺五加甙类的干扰素促诱生效应\[J\].中草药,1990,21(1):27.
\[3\]钱农,杨吉成,盛伟华,等.人参多糖及其皂甙等5种中药提取物促诱生人干扰素的研究\[J\].苏州医学院学报,1997,17(1):31-32.
作者简介:徐 艳(1975-),女,硕士,成都医学院病原教研室老师。
1.成都医学院,四川 成都 610083;
2.成都中医药大学,四川 成都 610083
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